A、關(guān)于基質(zhì)膠應用的常見(jiàn)問(wèn)題

1.ABW?Matrigengel高濃度基底膜基質(zhì)用于哪些實(shí)驗？
ABW?Matrigengel高濃度基底膜基質(zhì)可進(jìn)行體內應用研究，如高濃度蛋白可促進(jìn)腫瘤生長(cháng)。高濃度蛋白同時(shí)可使得
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)被注射入小鼠皮下后保持完整，有利于注射的腫瘤細胞和/或血管生成因子保持原位，便
于用于原位分析和/或以后的切除。

2.如何將ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)用于3D培養？怎樣制作3D膠？需要將細胞嵌入到
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中嗎？
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)可進(jìn)行體外應用研究，如制備厚層包被用于3D細胞培養。細胞可以?xún)惹对?br/>ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中生長(cháng)或者直接接種在A(yíng)BW?Matrigengel基底膜基質(zhì)表面（覆蓋法）生長(cháng)。

3.什么情況下，需要使用無(wú)酚紅ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)？
對于涉及顏色檢測的實(shí)驗，推薦使用無(wú)酚紅ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)，如使用熒光染料或Drabkins法計數內皮
細胞成管實(shí)驗。對于子宮內膜細胞培養，也需使用無(wú)酚紅ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)。
此外，酚紅和非甾體雌激素結構類(lèi)似，有類(lèi)雌激素效應。在實(shí)驗動(dòng)物體內具有干擾內分泌和荷爾蒙代謝的能力。

4.如何從ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中收獲細胞？
推薦使用中性蛋白酶消化或細胞回收方案來(lái)收獲培養在A(yíng)BW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中的細胞。
（1）中性蛋白酶消化
中性蛋白酶相比胰酶、膠原酶或其他蛋白水解酶能夠更溫和有效地獲得單細胞懸液，不會(huì )損傷細胞或細胞表面蛋白
。對于需要繼續接種培養或進(jìn)行檢測的細胞，使用中性蛋白酶不會(huì )產(chǎn)生損傷。此外中性蛋白酶也可以用于組織分離。
（2）細胞回收
對于代謝研究和需抽提細胞中RNA時(shí)，建議在4℃使用細胞回收解決方案進(jìn)行非酶消化的細胞收獲。因為
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中含有痕量的RNA，進(jìn)行RNA分析時(shí)，應設置一個(gè)ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)（不接
種細胞）的對照組。
（3）其它
降低溫度至4℃-6℃使ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)解聚，以適當轉速離心破壞ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)結構
，獲得單細胞懸液。此方法僅適合少部分應用場(chǎng)景。

5.哪些情況應該選用薄膠，哪些情況應該選用厚膠，3D細胞培養有哪些應用？
薄膠主要用于輔助細胞貼壁，有利于細胞增殖；如原代細胞培養，需要一層薄薄的蛋白層輔助，就可以選用薄膠。
厚膠主要用于3D細胞培養；如大鼠主動(dòng)脈組織分化為毛細血管樣結構（RingAssay），以及進(jìn)行細胞侵襲實(shí)驗等。
3D細胞培養實(shí)驗，可以建立起生理上的細胞-細胞與細胞-細胞外基質(zhì)相互作用，主要是用于研究細胞與細胞間的相
互作用以及更復雜的結構作用，如生物組織等。

6.進(jìn)行內皮管形成實(shí)驗，應該選用多大濃度的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)呢？
進(jìn)行該實(shí)驗，ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)最低濃度應不低于10mg/mL。

7.做細胞侵襲實(shí)驗，需要使用多少ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)進(jìn)行包被？
進(jìn)行細胞侵襲實(shí)驗，以包被24孔板為例，推薦使用每孔0.1mL(濃度200-300μg/mL)的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)
（貨號為082704）。

8.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)的最低成膠濃度是多少？
不同的實(shí)驗需要不同濃度的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)，用戶(hù)應該根據具體的實(shí)驗需求確定。
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)最低成膠濃度為3mg/mL。稀釋時(shí)不能簡(jiǎn)單進(jìn)行體積倍比稀釋?zhuān)煌伍g的
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)濃度有差異，應該根據最終工作濃度(mg/mL)算出需要加入的稀釋液體（如PBS或無(wú)血
清培養基）的量。用于體內研究的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)，為了避免成膠不完全，最終工作濃度不應低于
4mg/mL。

9.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)膠塊在體內可以維持多長(cháng)時(shí)間？
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)膠塊可以在體內維持至少一周的時(shí)間。

10.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)可以誘導ES/iPS細胞分化嗎？
可以的，已經(jīng)有相關(guān)論文報道ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)可以用于ES/iPS細胞的分化研究。

B、關(guān)于基質(zhì)膠操作的常見(jiàn)問(wèn)題

1.使用ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)時(shí)，需要將移液管、吸頭和離心管預冷嗎？
是的。因為ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)在高于10℃的條件下即會(huì )開(kāi)始成膠，我們推薦操作基底膜基質(zhì)時(shí)使用預冷
的移液管、吸頭和離心管。

2.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)會(huì )快速聚合嗎？
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)在22℃至35℃時(shí)會(huì )快速聚合成膠。

3.使用ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)包被過(guò)的培養皿可以?xún)Υ娑嚅L(cháng)時(shí)間呢？
包被過(guò)的培養皿最好當天使用，具體情況取決于實(shí)驗目的。需要保存的情況下，可在37°C培養箱中最多存放7天。保
存時(shí)ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)表面需要使用無(wú)血清培養基均勻覆蓋，保持濕潤。

4.怎樣稀釋ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)?
使用冰上預冷的無(wú)血清培養基或者pH7.4的PBS對ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)進(jìn)行適當比例的稀釋。

5.應該如何對ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)進(jìn)行移液操作?
推薦使用預冷的移液器或者注射器操作，移液管、槍頭同樣需要預冷。吸液時(shí)不要觸及瓶子底部；分液時(shí)切忌過(guò)快、
用力過(guò)猛。如果使用移液管分液5mL時(shí)，應該吸取6mL，分液到移液管內仍有1mL時(shí)即停止；如果使用自動(dòng)移液器，按壓
到第二檔位吸液，然后按壓到第一檔位進(jìn)行分液。

6.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)可以反復凍融嗎？
建議用戶(hù)第一次融化后按照單次用量進(jìn)行分裝，保存。

7.未稀釋的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中出現的沉淀應該怎么樣處理？
4℃下低速離心，去除沉淀物。

8.未使用完的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)應該怎樣保存？
與細胞培養基或緩沖液混合過(guò)但未使用完的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)，不建議保留再用。

9.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)可以?xún)Υ嬖?70℃嗎？
可以。 ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)可以?xún)Υ嬖?70℃。建議客戶(hù)將整瓶的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)進(jìn)行分裝，
儲存于聚丙烯或其他可以耐受超低溫條件材質(zhì)的小管中，方便保存和使用。

10.為什么細胞沒(méi)有貼壁，ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)也脫落了？
首先，需要檢查細胞的接種濃度是否過(guò)高， ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)的用量應等同于細胞培養體系中培養基的用
量。其次，如果ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)被稀釋到過(guò)低的濃度，形成的膠體容易從組織培養器皿表面分離。

11.使用ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)培養的細胞，如果需要進(jìn)行切片或者免疫組織化學(xué)及免疫熒
光檢驗，該怎樣固定呢？如何避免解聚？
可以使用2%濃度的多聚甲醛進(jìn)行固定。為避免固定后出現解聚的情況，可以加入1%濃度的戊二醛。戊二醛作為固定
劑，常用于電鏡觀(guān)察。如果用戶(hù)需要進(jìn)行免疫熒光檢驗，加入戊二醛后，會(huì )出現明顯的背景熒光。為了解決這一問(wèn)題，我
們建議用戶(hù)在固定之后，使用NaBH4使熒光淬滅。NaBH4極易起泡，進(jìn)行該步驟時(shí)，必須在水平操作臺上小心操作，避
免晃動(dòng)，盡量減少氣泡的形成。另外，用戶(hù)也可以嘗試使用較低濃度的戊二醛進(jìn)行固定，如0.1%到0.5%，濃度越低，背
景熒光信號越少。

C、關(guān)于基質(zhì)膠成分的常見(jiàn)問(wèn)題

1.為什么我的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)很粘稠？
基質(zhì)膠的蛋白濃度越高，膠體越粘稠。如果濃度高于13.0mg/mL，基質(zhì)膠會(huì )顯得非常厚重。
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)在未稀釋前都會(huì )比較粘稠。粘稠的高濃度ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)可直接使用
，如用于培養腫瘤細胞和/或血管生成因子，注射于小鼠體內后，使細胞保持原位，便于原位分析和/或以后的切除等；
或者稀釋后，按照標準濃度的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)使用方法使用，具體稀釋濃度根據實(shí)驗需求確定。
除因為產(chǎn)品本身濃度高而粘稠外，基質(zhì)膠的狀態(tài)還與運輸過(guò)程中溫度的變化和儲藏條件有關(guān)。整個(gè)運輸過(guò)程中必須
使用干冰冷藏。如果儲藏ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)的冰箱帶有自動(dòng)除霜功能，冰箱除霜過(guò)程中升溫，可能使基質(zhì)膠
成膠。所以，切忌將ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)儲藏于此類(lèi)冰箱中。為保證ABW?Matrigengel底膜基質(zhì)的使用效果
，凍融次數應該盡可能減少。拿到新的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)后，請按照單次用量進(jìn)行分裝。每次融化操作，
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)都應置于冰上。如果ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)在成膠狀態(tài)被凍住，再次融化時(shí)將不
能成恢復液體狀態(tài)。

2.為什么ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)在37°C成膠，而在4°C時(shí)卻呈液體狀態(tài)？
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)是一種從小鼠骨肉瘤中提取的重組基底膜，新鮮提取的原料中主要包括以下成分：層
粘連蛋白，IV型膠原,巢蛋白，基底膜聚糖、表皮生長(cháng)因子、類(lèi)胰島素生長(cháng)因子及其他生長(cháng)因子。這些蛋白構成了
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)的基本結構。
在22℃-37℃溫度條件下，大分子間的共價(jià)鍵可以結合，促使ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)形成凝膠。而在低溫條
件（如4℃）下，由于沒(méi)有足夠的能量促使共價(jià)鍵結合，所以ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)呈現液體狀態(tài)。

3.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中含有DNA和/或RNA嗎？
是的。ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)沒(méi)有經(jīng)過(guò)DNA酶或RNA酶消化處理，可能會(huì )含有痕量的DNA、RNA。

4.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中有血管內皮生長(cháng)因子（VEGF）和金屬蛋白酶（MMPs）嗎?
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中含有微量的血管內皮生長(cháng)因子（VEGF），也可能含有小鼠腫瘤細胞來(lái)源的痕量金屬
蛋白酶（MMPs）。

5.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中有LDEV嗎?
沒(méi)有的。ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)經(jīng)免疫方法及PCR方法檢測，并不含有乳酸脫氫酶增高病毒（LDEV）或者乳
酸脫氫酶增生病毒（LDHV）。此外，我們還針對小鼠群體及腫瘤來(lái)源篩查了其他種類(lèi)的病毒，詳細信息請參見(jiàn)產(chǎn)品分
析證明書(shū)COA。

6.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中有尿素嗎？
沒(méi)有的。在A(yíng)BW?Matrigengel基底膜基質(zhì)生產(chǎn)過(guò)程中使用了尿素，后續流程中經(jīng)過(guò)透析方法已經(jīng)去除了。

7.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)使用的什么緩沖液？
低葡聚糖DMEM(1g/L)，其中包含50μg/mL慶大霉素。

8.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中含有纖維連接蛋白（Fibronectin）嗎？
是的，通過(guò)使用WesternBlot檢驗，我們在A(yíng)BW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中發(fā)現了微量的纖維連接蛋白
(Fibronectin)。

9.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中含有玻連蛋白（Vitronectin）嗎？
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)是從小鼠腫瘤組織提取的，某些腫瘤組織中可能含有微量的血液，因此
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中可能會(huì )有痕量的玻連蛋白（vitronectin）。

10.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中還有什么別的物質(zhì)？
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中還可能含有濃度小于0.02%的三氯甲烷，以及腫瘤細胞產(chǎn)生的其他未知蛋白或分子。

11.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)的生產(chǎn)過(guò)程會(huì )引起層粘連蛋白變性嗎？
不會(huì )引起層粘連蛋白變性。

12.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)的折射率是多少？
20℃條件下， ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)的折射率是1.3406到1.3407，相對折射率為1.0056（同等條件下，水的
折射率為1.333）。

13.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)會(huì )有自發(fā)熒光嗎？
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)是一種蛋白混合物，經(jīng)過(guò)透析處理后溶解在DMEM培養基中。為防止微生物污染，培
養基中添加了慶大霉素。所以ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)可能引發(fā)熒光的組分包括其中的蛋白質(zhì)成分，維生素成分以
及慶大霉素（氨基糖苷類(lèi)抗生素）。如果需要使用熒光檢測細胞生長(cháng)狀態(tài)，建議使用者建立對照實(shí)驗，在所需要的波長(cháng)條
件下進(jìn)行對比，以便排除背景熒光。

拜爾迪生物是?；锏氖跈啻砩?，更多產(chǎn)品請咨詢(xún)：

北京拜爾迪生物技術(shù)有限公司

咨詢(xún)熱線(xiàn)：010-62960866