隨著(zhù)生命科學(xué)的發(fā)展，圍繞蛋白進(jìn)行的研究越來(lái)越多，抗體試劑在實(shí)驗中的重要性越來(lái)越舉足輕重。面臨著(zhù)紛呈復雜 的抗體試劑市場(chǎng)，如何選擇到適合自己實(shí)驗的抗體就變得尤為重要。

當我們要檢測目的蛋白在組織中表達情況的時(shí)候，如何選擇適合我們實(shí)驗需要的抗體，并恰當保存使用，是每個(gè)科研 人員需要細心考慮的?？贵w種類(lèi)繁多，品牌眾多，技術(shù)參數不一，價(jià)格和質(zhì)量更是相差甚大，如何購買(mǎi)到高質(zhì)量?jì)r(jià)格合適 的抗體，并準確地做出我們想要的結果，其中有很多細節需要注意。

一、一抗的選擇 

目的蛋白的信息

確定檢測的目的蛋白是否與抗體識別蛋白信息吻合，注意中英文名稱(chēng)、別名等信息。

某些蛋白具有多種不同的亞型，這需要在選擇抗體之前確定要研究的蛋白亞型。還有些抗體由于其抗原選擇的是 不同蛋白亞型共有的肽段區域，是可以同時(shí)識別多個(gè)亞型的。有的蛋白通過(guò)剪切加工才能轉變?yōu)槌墒斓幕钚孕问?，?Caspase、Insulin 等，這就需要根據研究需要，選擇針對前體或成熟形式的特異性抗體。 

抗體制備所用抗原的信息

抗體是由各種不同抗原免疫宿主制備得來(lái)，抗原類(lèi)型包括：全長(cháng)蛋白、蛋白片段、多肽、全有機體 ( 如：細菌 ) 或細胞， 抗體說(shuō)明書(shū)一般都有制備抗體所用抗原的描述。在有些情況下，需要查閱抗體制備相關(guān)抗原信息來(lái)選擇抗體。比如，針對 重組表達蛋白選擇抗體，如果是表達部分蛋白片段，則需要注意抗體的抗原區域是否在該片段區域內。如果打算用 FACS 流式檢測活細胞的表面蛋白，則需選擇含該表面蛋白的胞外域來(lái)免疫制備的抗體。某些特殊蛋白 ( 如病原體蛋白 ) 未經(jīng)過(guò) 內部驗證種屬的目的蛋白，需要求助生產(chǎn)商進(jìn)行蛋白同源性序列比對，并結合制備抗體所用的抗原序列，查看交叉反應的 情況。

某些抗體要求樣本經(jīng)過(guò)某些特殊處理，例如：許多抗體只識別還原和變性的、表位已暴露不受二級四級結構阻礙的蛋 白樣本，另一方面，某些抗體僅識別天然折疊狀態(tài)的蛋白。當選擇免疫組化的抗體時(shí)，應注意某些抗體只識別未固定的冷 凍的組織，而另一些抗體則適用于無(wú)需抗原修復解交聯(lián)步聚的甲醛固定石蠟包埋的組織，這些都會(huì )在抗體說(shuō)明書(shū)上應用部 分標示出來(lái)。

了解樣本抗原蛋白的結構性質(zhì)有助于選擇最合適的抗體，待測樣本蛋白的結構域和樣本在提取和處理過(guò)程中是否會(huì )變 性，蛋白空間構象的改變，會(huì )影響抗體的免疫親和反應。 

修飾位點(diǎn)的信息 

在選擇合適的抗體用于特定修飾位點(diǎn)研究時(shí)，需要特別注意，不同位點(diǎn)的修飾可能有不同的機制存在，不宜一概而論。 有關(guān)不同修飾位點(diǎn)的功能，可以通過(guò)查閱文獻確定。另外，由于有的蛋白存在不同亞型且序列高度同源，而不同亞型的某 些磷酸化修飾位點(diǎn)周?chē)男蛄型耆嗤?，因此針對這些保守的修飾位點(diǎn)的抗體往往會(huì )同時(shí)識別不同亞型的相似修飾位點(diǎn)。 

實(shí)驗樣本的種屬信息

抗體一般會(huì )在出廠(chǎng)前對常見(jiàn)的不同種屬目標樣本進(jìn)行內部驗證，以確定可以滿(mǎn)足的不同種屬類(lèi)型，可以在產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 的 Species-Reactivity 一欄中看到 ( 如人、小鼠、大鼠等 )。通過(guò)驗證，達到質(zhì)檢要求的種屬會(huì )明確標記，以備參考。一些 沒(méi)有標明的種屬，也有可能是可以應用的，建議通過(guò)聯(lián)系抗體公司技術(shù)支持來(lái)獲得相關(guān)抗原序列比對的信息，根據蛋白同 源性的情況以確定是否可以用于該種屬的樣本。為了避免實(shí)驗風(fēng)險，盡量不要使用說(shuō)明書(shū)中沒(méi)有提及的標本的種屬的抗體。

抗體應用的實(shí)驗類(lèi)型

抗體一般會(huì )在出廠(chǎng)前對常見(jiàn)的抗體應用 (WB、IP、ChIP、IHC、IF、FCM) 進(jìn)行內部驗證，以確定是否可以滿(mǎn)足不同 應用要求。通過(guò)驗證，達到質(zhì)檢要求的抗體會(huì )明確標記，以備參考。一些沒(méi)有標明的應用，往往是因為經(jīng)過(guò)驗證沒(méi)有達到 質(zhì)檢標準 , 因而不推薦根據經(jīng)驗或常識去推測某個(gè)抗體的應用。比如，有的客戶(hù)會(huì )認為，既然某個(gè)抗體可以用于 IHC，根 據經(jīng)驗推斷應該可以用于 IF，但畢竟這是兩個(gè)不同的應用，這樣做可能會(huì )浪費很多時(shí)間和試劑而不能獲得結果?？贵w廠(chǎng)家 不推薦您使用沒(méi)有標明的應用，可以挑選其他的貨號，可能有適用于這個(gè)應用的更好的其它產(chǎn)品。如果抗體說(shuō)明書(shū)沒(méi)有提 及的應用類(lèi)型，并不意味著(zhù)該抗體一定不適用于此種應用類(lèi)型，而僅是說(shuō)明尚未通過(guò)此種應用的內部驗證。為了避免實(shí)驗 風(fēng)險，當計劃使用說(shuō)明書(shū)中沒(méi)有提及的應用方法時(shí)，可向生產(chǎn)商申請試用裝，進(jìn)行初步預實(shí)驗后，再決定是否購買(mǎi)。 標記物的信息 有一些實(shí)驗，如多重免疫熒光、多指標流式測定可能會(huì )使用到直接標記的一抗(簡(jiǎn)稱(chēng)直標一抗)。在進(jìn)行直標一抗選擇時(shí)， 需要了解到自己將要使用的儀器能檢測到的熒光范圍，針對不同的參數要求選擇合適的標記物。在設計多重實(shí)驗時(shí)，應考 慮每種熒光基團的獨特性質(zhì)，如最大吸收波長(cháng)和最大發(fā)射波長(cháng)，消光系數和斯托克斯位移等因素。有關(guān)標記物選擇的細節， 我們將在后面的免疫熒光與流式技術(shù)部分詳加介紹。 文獻引用情況 有的時(shí)候，針對某一個(gè)蛋白可能有不同貨號的產(chǎn)品，很多人喜歡通過(guò)查閱文獻來(lái)確定自己將要選擇的抗體貨號是否有 過(guò)較好的表現。一般抗體公司都會(huì )收集引用自己產(chǎn)品的文獻，這些產(chǎn)品都是經(jīng)過(guò) SCI 驗證過(guò)的，所以大可放心地使用。不過(guò)， 也不排除抗體公司近期生產(chǎn)出更好的抗體，可以向公司咨詢(xún)。 

二、二抗的選擇 

一抗的來(lái)源種屬 

主要根據一抗來(lái)源種屬而決定二抗，如一抗是小鼠來(lái)源，那二抗就選擇抗小鼠的即可。

二抗應用的實(shí)驗類(lèi)型

針對不同的實(shí)驗應用，需要考慮二抗所偶聯(lián)的標記物，如 HRP、Biotin、熒光素等。WB 與 IHC 所用的二抗，所帶的 標記物主要選擇 HRP 和 Biotin，而免疫熒光和流式應用可根據實(shí)驗設計的需要，選擇不同熒光素標記的二抗，如 FITC、 Cy3、PE 等。