質(zhì)譜級賴(lài)氨酰肽鏈內切酶

Lysyl Endopeptidase^?

　　本產(chǎn)品是質(zhì)譜分析前處理時(shí)常用的蛋白分解酶即賴(lài)氨酰肽鏈內切酶，該酶可以特異性切除賴(lài)氨酸基團C末端的多肽，可用于蛋白測序分析和 Lys-X 化合物的酶合成。若同時(shí)使用賴(lài)氨酰肽鏈內切酶和胰酶，可更好地切斷賴(lài)氨酸基團的多肽，增加多肽的數量。產(chǎn)品已按照使用習慣做成小包裝，是方便使用的冷凍干燥品。20 μg/支可用于100-200個(gè)樣品的凝膠內消化。

來(lái)源：細菌

外觀(guān)：凍干粉（包含２ mmol/L Tris-HCl 緩沖液，pH８）

活性：0.03～0.07 AU/vial

分子量：27,000（瓊脂糖過(guò)濾），30,000（SDS-PAGE）

溶解性：溶于水或緩沖液

穩定性：溶解于 pH 值 5.0-12.0 的 Tris 緩沖液中，可在４℃穩定保存２年；在 pH 值 6.0-11.0、30℃時(shí)能穩定保存，但溫度超過(guò)50℃時(shí)不穩定。

最適pH值：9.0~9.5

等電點(diǎn)：6.9~7.0 

底物特異性：

可水解底物——Tos-Lys-OMe、Bz-Lys-NH₂、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA

不可水解底物——Bz-Arg-NH₂、Bz-Arg-pNA、Arg-pNA

抑制劑：DFP、PMSF、TLCK

◆特點(diǎn)

●  高特異性、高蛋白質(zhì)消化率、適用于蛋白質(zhì)譜分析

●  提高裂解效率、增加肽段數量

●  根據使用量特意制備小包裝，方便使用

◆應用

　　分別采用胰蛋白酶（Tp）、賴(lài)氨酰肽鏈內切酶（Lys-C）和 Tp與Lys-C 聯(lián)用進(jìn)行膠內酶切的效果比較。

　　牛血清蛋白 BSA 的條帶（100 ng）通過(guò) SDS-PAGE 獲得，然后分別用 Tp、Lys-C 和 Lys-C+Tp 進(jìn)行酶切，再用 MALDI-TOFMS 法進(jìn)行分析。

　　這些蛋白酶的實(shí)驗效果見(jiàn)下表。

表 1：Tp、Lys-C 和 Lys-C+Tp 的結果對照

這些結果表明 Lys-C 酶解的漏切位點(diǎn)數（Missed Cleavage）最少。Tp 酶解時(shí)加入 Lys-C 后，漏切位點(diǎn)數有所降低，同時(shí)，可以鑒定出更多的多肽。

胰蛋白酶（Tp）（圖 ａ）和賴(lài)氨酰肽鏈內切酶（Lys-C）+Tp（ 圖 ｂ）酶切后的質(zhì)譜結果對照圖。

Lys-C+Tp 酶切后，可以在 m/z=2000 時(shí)得到吸收峰，而單獨的 Tp 酶切在 m/z=2000 時(shí)沒(méi)有吸收峰。該結果表明 Lys-C 可以提高測序覆蓋度。

( 數據由大阪醫療中心和婦嬰健康研究所Ｙ. Wada 博士提供 )

賴(lài)氨酰肽鏈內切酶

　　賴(lài)氨酰肽鏈內切酶，最初由 Masaki 等人從土壤細菌中分離得到。該酶可以特異性剪切賴(lài)氨酸殘基Ｃ末端和Ｓ-氨乙基半胱氨酸殘基的肽鍵，用于蛋白測序和 Lys-X 化合物的酶催化合成。該酶穩定性高，在４Ｍ尿素或 0.1% SDS 溶液中 30℃ 孵育６小時(shí)之后，仍然擁有完整的生物活性。

※ 本頁(yè)面產(chǎn)品僅供研究用，研究以外不可使用。

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