VA-044

用于脂質(zhì)提取的聚合物引發(fā)劑

　　一個(gè)世紀以來(lái)，生物學(xué)家們一直夢(mèng)想著(zhù)能夠透過(guò)器官甚至整個(gè)機體，親眼看到細胞連接和精細結構，現在隨著(zhù)組織透明化技術(shù)的完善，這一夢(mèng)想終于成為了現實(shí)。

◆原理

VA-044 作為組織透明化技術(shù)中起關(guān)鍵作用的水溶性偶氮引發(fā)劑，普遍適用于高分子合成的水溶液聚合與乳液聚合。在 CLARITY 方法中，VA-044 作為引發(fā)劑，催化丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺和 PFA 形成水凝膠。

2013 年3 月，斯坦福大學(xué)的 Karl Deisseroth 博士領(lǐng)導的團隊在自然雜志（Nature）上發(fā)表了 Structural and molecularinterrogation of intact biological systems 的論文，文中介紹了制備組織的方法 CLARITY。該方法是將組織浸透在水凝膠單體溶液中（Hydrogel Monomer Solution）中，經(jīng)電泳使組織呈現透明。這種水溶膠—組織雜交的方式可以維持組織的原有結構，使生物分子結合到水凝膠的網(wǎng)孔上。重要的是脂類(lèi)不會(huì )結合到水凝膠上，因而可以通過(guò)這種方式將脂類(lèi)有效去除。通過(guò)這種方法制備的組織樣品可用于后期的影像實(shí)驗，免疫染色，原位雜交等實(shí)驗。

　　CLARITY 可用于熒光蛋白質(zhì)和抗體的免疫染色，可作為解析腦神經(jīng)回路的有效工具。VA-044 是論文實(shí)驗步驟中透明化工程的使用試劑。

◆特點(diǎn)? 優(yōu)勢

●   操作簡(jiǎn)單，固定蛋白后只需進(jìn)行電泳；

●    可保持組織、器官和全身結構的完整性；

●    可進(jìn)行原位雜交和免疫組化實(shí)驗，可進(jìn)行多輪染色和脫色步驟；

◆案例?應用

Clarity 介紹

PARS 介紹

2014 年7 月，加州理工學(xué)院的研究團隊在細胞雜志（Cell）上發(fā)表論文 Single-Cell Phenotyping within TransparentIntact Tissue through Whole-Body Clearing，將 CLARITY 技術(shù)推進(jìn)到一個(gè)新的高度——全身組織透明化技術(shù)，稱(chēng)為 PARS（Perfusion-assisted Agent Release in Situ）。這種技術(shù)將透明劑持續泵入動(dòng)物的循環(huán)系統從而進(jìn)入各個(gè)組織，或者通過(guò)腦脊液管道泵入大腦，再去除脂質(zhì)，使器官和生物體被高分子滲透而呈現透明，并可用熒光抗體分析和揭示具有完整連接性的細胞結構和三維細胞排列。

CLARITY 處理的小鼠腦

CLARITY 處理的小鼠大腦成像

CLARITY 處理的 Thy1-YFP（H Line）小鼠大腦的熒光觀(guān)察
（A）從大腦皮質(zhì)到海馬的３-D觀(guān)察圖像
    （B）大腦皮層Ⅴ層的錐體細胞的樹(shù)突圖像
拍攝條件：雙光子   使用設備：Olympus FV1000 直立顯微鏡，25 倍浸液物鏡

CLARITY+抗體處理的小鼠大腦成像

CLARITY 處理后，用 Iba1抗體染色 Thy1-YFP（Ｈ線(xiàn)）小鼠大腦的熒光觀(guān)察
　　　　?。ˋ）在大腦皮質(zhì)的小膠質(zhì)細胞的３-D觀(guān)察圖像
（B）從表面層觀(guān)察皮質(zhì)Ⅰ層的圖像
拍攝條件：?jiǎn)喂庾?span style="margin: 0px; padding: 0px; line-height: 28px;">   使用設備：Olympus FV1000 直立顯微鏡，25 倍浸液物鏡

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