本文主要針對以下幾個(gè)常見(jiàn)的亞細胞架構：細胞膜、細胞質(zhì)、細胞骨架，為大家介紹如何選擇合適的試劑/探針?lè )謩e對它們進(jìn)行染色。

利用熒光染料對細胞膜進(jìn)行標記和示蹤的成像技術(shù)是研究細胞膜結構和功能的重要手段。

DiD、DiO、DiI、DiR和DiS染料是最常見(jiàn)的細胞膜染料，它們是一族親脂性的熒光染料，專(zhuān)門(mén)用來(lái)染細胞膜和其它脂溶性生物結構。該系列染料進(jìn)入細胞膜后，會(huì )在整個(gè)細胞膜上側向擴散，在最佳濃度時(shí)可以使整個(gè)細胞膜染色。它們與細胞膜結合后熒光強度會(huì )大大增強，具有很高的淬滅常數和激發(fā)態(tài)壽命，高熒光強度至少維持在30天，甚至長(cháng)達2年以上。

DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和DiR（深紅色熒光）的獨特熒光顏色為活細胞的多色成像和流式細胞分析提供了便利的工具。

DiO和DiI可分別與標準FITC和TRITC過(guò)濾器一起使用。

DIO染料聚合物在3D腫瘤球體中的標記

DiI染料標記雞胚胎神經(jīng)嵴細胞

DiD被633 nm He-Ne激光器激發(fā)，并且具有比DiI更長(cháng)的激發(fā)和發(fā)射波長(cháng)，為標記具有顯著(zhù)內在熒光的細胞和組織提供了有價(jià)值的替代方案。DID染料的染色效率高，均一，不易猝滅，無(wú)明顯細胞毒性，且受自身熒光背景干擾小。目前DID已成功應用于多種細胞的體內示蹤研究，如Treg細胞、間充質(zhì)干細胞、腫瘤細胞、造血干細胞等。

DID染色效率的激光共聚焦掃描成像圖

DiR發(fā)出的紅外光可以通過(guò)細胞和組織的有效傳輸以及紅外范圍內的低水平自發(fā)熒光，可用于體內成像或示蹤。

細胞質(zhì)是細胞質(zhì)膜以?xún)?、細胞核以外的部分。細胞質(zhì)基質(zhì)是指細胞質(zhì)去除細胞器之外的部分，呈現膠質(zhì)狀態(tài)。是正常細胞進(jìn)行生命活動(dòng)的主要場(chǎng)所，正常狀態(tài)下為透明的膠狀物，內含細胞新陳代謝所需的多種營(yíng)養物質(zhì)，由水、無(wú)機鹽、脂質(zhì)、糖類(lèi)、氨基酸、核苷酸和多種酶組成。

Calcein AM/6-CDCFDA 都是一種可對活細胞進(jìn)行熒光標記的細胞染色試劑。

原理相似：Calcein AM/6-CDCFDA能夠輕易穿透活細胞膜，進(jìn)入到細胞質(zhì)后，酯酶會(huì )將其水解留在細胞內，發(fā)出強熒光。因為其細胞毒性低，是最適合作為活細胞的熒光探針。

而Lucifer Yellow Cadaverine 通常作為可固定的熒光示蹤劑。Lucifer Yellow Cadaverine 可以標記細胞中的內吞噬泡。由于其水溶解度高、熒光明亮、細胞毒性低，并且具有較寬的Stokes shift，我們可以在固定和活細胞中觀(guān)察內吞噬泡。此外，它還可以用于結合羧酸基團。

細胞骨架指真核細胞質(zhì)中與保持細胞形態(tài)結構和細胞運動(dòng)有關(guān)的蛋白質(zhì)纖維網(wǎng)架體系(包括微管、微絲、中間絲)。主要參與維持細胞形狀、細胞運動(dòng)、細胞內物質(zhì)運輸、染色體分離和細胞分裂等重要生命活動(dòng)。

微絲呈細絲狀，在細胞中成束排列，其主要成分是肌動(dòng)蛋白，絲狀肌動(dòng)蛋白（F-actin）是肌動(dòng)蛋白多聚體，由肌動(dòng)蛋白單體（G-actin）形成。

微絲在細胞生命活動(dòng)中有許多重要功能。

鬼筆環(huán)肽是從致命的鵝膏菌（Amanita phalloides）蘑菇中分離的毒素，是一種雙環(huán)肽，能與F-actin特異性結合。當用熒光染料標記時(shí)，可以顯示微絲骨架在細胞中的分布，它是研究F-肌動(dòng)蛋白分布的非常方便的工具。熒光標記的鬼筆環(huán)肽在納克水平就可與F-actin選擇性的結合并且易溶于水，為檢測組織切片，培養細胞和無(wú)細胞體系中的actin的定位和定量提供了非常方便的標記方法。

產(chǎn)品特點(diǎn) ： 

多種顏色可選擇，熒光亮度高，光穩定性好，適合做顯微鏡檢測。
親和力高：平均每個(gè) F - actin 亞基結合一個(gè)鬼筆環(huán)肽分子。

特異性強：特異性結合于 F - actin，而不與 G - actin 結合。

優(yōu)于抗體染色：與 F - actin 的結合親和力在不同物種間無(wú)顯著(zhù)變化。

靈敏度高：納摩爾濃度 (nM) 染色即可滿(mǎn)足實(shí)驗要求。

適用范圍廣：無(wú)物種差異性，也適用于甲醛固定和打孔處理后的組織樣本。