ELISA的歷史
ELISA的發(fā)展起點(diǎn)要追溯到RIA（radioimmunoassay）的歷史，Yalow和Berson在1960s第一次使用碘標記的RIA技術(shù)來(lái)測定內源血漿中的胰島素水平，然而放射性實(shí)驗安全風(fēng)險太高，不適合進(jìn)行大面積推廣應用，這時(shí)候一些科學(xué)家便想用生物酶來(lái)代替放射性標記，但如何將酶與抗體或抗原連接而不影響彼此的生物活性成為了必須要捅破的窗戶(hù)紙，盡管在當時(shí)被普遍認為是不可能的實(shí)驗，Perlmann和Schuurs 還是在1966年力證了酶連接的免疫試驗是可行的，直到1971年，Perlmann和Schuurs兩個(gè)研究組幾乎同時(shí)發(fā)表了ELISA的文獻，向世人系統性的介紹了ELISA的方法，此后，ELISA經(jīng)歷迅速的，直接開(kāi)啟了商業(yè)臨床和醫療診斷的應用。
ELISA的實(shí)驗原理
ELISA是以免疫學(xué)反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。
由于抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔（當然就是我們熟知的96孔板啦）中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩定性。
ELISA的類(lèi)型
目前酶聯(lián)免疫吸附測定使用的最多的是檢測特異性的抗體或可溶性的抗原，因被檢測的物質(zhì)可分為多類(lèi)，且每次的結構與特征都不相同，所以為了提高靈敏度開(kāi)發(fā)了不同類(lèi)型的ELISA方法，主要分為四種：
（1）直接ELISA
這是Perlmann最早建立的ELISA方法，通常用于檢測分子量比較大的抗體或抗原，以及抗體篩選和抗原表位作圖，這個(gè)模式比較簡(jiǎn)單，將抗原包裹在孔中，加入酶連接的特異性抗體，靶向固定化的抗原，成為牢固的復合體，洗去結合不緊密的抗體或背景蛋白后，加入合適的底物量，孵育使其發(fā)生特定的酶反應催化，產(chǎn)生顯色反應，通過(guò)檢測熒光信號來(lái)定量分析物。
Direct ELISA
Direct ELISA方法優(yōu)缺點(diǎn)比較
（2）間接ELISA
由于受到direct ELISA方法的鼓舞，Lindstr?m和Wager在1978年發(fā)表了indirect ELISA方法，之所以叫indirect ELISA方法，是因為相對于direct ELISA，它引入了第二個(gè)抗體來(lái)進(jìn)行檢測，與direct ELISA不一樣的是，它通過(guò)使用一抗能結合多個(gè)二抗，從而放大了檢測靈敏度，就好像在一個(gè)黑暗的房間，direct ELISA只有一個(gè)50W的燈泡，而indirect ELISA能接上兩個(gè)50W的燈泡，這樣房間的亮度是不一樣的。
Indirect ELISA
Indirect ELISA方法優(yōu)缺點(diǎn)比較
（3）夾心法ELISA
這項ELISA技術(shù)是最受歡迎的，1977年，Kato和他的同事發(fā)明了這項結合direct與indirect ELISA 技術(shù)特點(diǎn)的經(jīng)典方法，“sandwich”最明顯的特點(diǎn)就是特異性高，靈敏度高，試想去分辨身高長(cháng)相完全一致的雙胞胎，你只熟悉并想找到其中一個(gè)人，然而單靠肉眼已經(jīng)無(wú)法做出最正確的判斷了，這時(shí)候需要聽(tīng)他們各自的聲音便來(lái)區分。Sandwich ELISA將一抗固定在孔表面，含目標抗原的測試樣被加入到孔中使其充分結合抗體，待洗去未結合的雜質(zhì)后，加入酶標記二抗結合抗原的另一表位，形成“sandwich”的結構，這時(shí)候的抗原就像被兩個(gè)面包片夾著(zhù)的奶油，通過(guò)酶催化發(fā)生顯色反應就可以測定抗原的含量。
Sandwich ELISA
Sandwich ELISA方法優(yōu)缺點(diǎn)比較
（4）競爭法ELISA
Competitive ELISA方法是所有ELISA里最為復雜的測試方法，它是一種檢測干擾信號的強度來(lái)反應樣品中的抗原水平，通常以酶標記的抗原作為競爭抗原，與樣品來(lái)源的抗原分析物形成直接競爭，搶奪過(guò)量的固定化抗體上的結合位點(diǎn)，因此干擾信號越高，說(shuō)明樣品中的抗原越少，這跟“占坑”的理念是一致的。
Competitive ELISA
Competitive ELISA方法優(yōu)缺點(diǎn)比較
ELISA產(chǎn)品信息
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從抗體對的篩選、酶標板的選擇、包板、干樣、樣本稀釋液中基質(zhì)效應的控制、酶底物篩選、試劑瓶防漏測試的環(huán)節均經(jīng)過(guò)多重嚴格的監控，確保提供的每一個(gè)試劑盒具有最佳的性能和一致性。
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