產(chǎn)品規格：1mL（200T） 

儲存條件：4℃避光冷藏，請勿凍存。本產(chǎn)品在推薦條件下可以?xún)Υ?6 個(gè)月。

光譜特性：Annexin V-PE: Ex/Em = 488/578 nm

產(chǎn)品介紹 

細胞凋亡早期改變發(fā)生在細胞膜表面，這些細胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸( PS )從細胞膜內轉移到細胞膜外，使PS 暴露在細胞膜外表面。Annexin V 具有易于結合 到磷脂類(lèi)如PS 的特性，對PS 有高度的親和性。因此，該蛋白可充當一敏感的探針檢測暴露在細胞膜表面的PS。 

Annexin V-PE 可以與7-AAD/PI等聯(lián)合使用，來(lái)檢測細 胞凋亡情況。7-AAD/PI 可被排除在活細胞和早期凋亡細胞之外，而晚期凋亡細胞和壞死細胞可以同時(shí)被Annexin V-PE 和7-AAD結合染色呈現雙陽(yáng)性，從而來(lái)區分活細胞、早調細胞與晚凋細胞。

使用方法 

1. 根據實(shí)驗要求誘導細胞凋亡。檢測樣品中應包含未經(jīng)處理的細胞樣品，作為陰性對照。此外，設定一組樣品做單染，用于調節補償。 

2. 沉淀細胞 懸浮細胞：1000 rpm，4 ℃離心 5 min 沉淀細胞；貼壁細胞：用不含 EDTA 的胰酶消化細胞， 1000 rpm ，4 ℃離心 5 min 沉淀細胞，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(cháng)，以防引起假陽(yáng)性。對于特定的細胞，如果細胞無(wú)法完全離心至離心管底，可以適當延長(cháng)離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50 μL 左右的培養液，以避免吸走 細胞。

注：用胰蛋白酶消化然后使細胞在最佳細胞培養條件和培養 基中恢復約30分鐘，然后在染色。 胰蛋白酶消化會(huì )暫時(shí)破壞質(zhì)膜，允許Annexin V結合磷脂酰絲氨酸在細胞膜的細胞質(zhì)表面上，從而導致假陽(yáng)性染色。

3. 加入約1mL 4℃預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞，小心吸除上清。

4. 用適當的緩沖液重新懸浮細胞，調節其濃度1-5×10^6/mL （緩沖液可選擇終濃度為 2mM Hepes/NaOH, pH7.4，28mM NaCl，0.5mM CaCl2溶液）。 

5. 取100 μL 的細胞懸液于5mL流式管中，加入5μL Annexin V-PE 混勻后于室溫避光孵育5分鐘。 

6. 加入10μL 20μg/mL的7-AAD或PI，并加400 μL PBS，立刻進(jìn)行流式檢測。

注意事項： 

1. 熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，保存和使用過(guò)程中請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。 

2. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。