1 理化指標

                                                                          *HR 10/10 層析柱，5 cm 柱床高度

2 使用方法 

2.1 填料的準備 

     將干粉浸泡于純水或緩沖液中，液體可以適當多加一些，室溫下完全溶脹需 1-2 天，或者用 100℃純水浸泡大約半個(gè)小時(shí)。完全溶脹后除去上清液以及上層少許漂浮物，用緩沖液徹底清洗填料。

2.2 裝柱 

     （1）所有實(shí)驗材料均需平衡至色譜層析操作的溫度，所有的緩沖液進(jìn)行脫氣處理； 

     （2）檢查層析柱所有部件，特別是過(guò)濾網(wǎng)，密封圈，螺旋塞是否緊密，玻璃管是否干凈和完整。 

     （3）用去離子水清洗掉 20%乙醇保存液，用緩沖液配成勻漿。 

     （4）將柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位，務(wù)必使底端無(wú)氣泡。 

     （5）用玻璃棒引導勻漿沿著(zhù)柱內壁一次性倒入柱內，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開(kāi)柱子出液口，使凝膠在柱內自由沉降，連結好柱子頂端柱頭。 

     （6）打開(kāi)蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)流速的 1.33 倍的流速流過(guò)，使柱床穩定（注意壓力不要超過(guò)填料最大耐壓）。

2.3 平衡柱子 

     用上樣的平衡緩沖液平衡柱子后即可上樣。（當流出液的 pH 和電導值與起始緩沖液相同時(shí)層析柱即完全平衡）。

2.4 上樣

     樣品應溶解在起始平衡緩沖液中，或者通過(guò)透析或脫鹽的方法進(jìn)行緩沖液置換，將樣品緩沖液轉移至起始平衡緩沖液。樣品的粘度不應超過(guò)平衡緩沖液，上樣前必須使用 0.45um 微孔濾膜對樣品進(jìn)行過(guò)濾。 

     最常見(jiàn)的程序是讓目標分子結合到離子交換柱上，其他雜質(zhì)流出。然而，在一些情況下，離子交換柱結合雜質(zhì)而使目標分子流出，這樣的操作也是可以的。

     對于目標分子的吸附，選擇具有適當 pH 的緩沖液是至關(guān)重要的，請參考下表。

     緩沖液的離子強度應保持較低，以免干擾樣品結合，推薦的操作 pH 應在緩沖液 pKa 的 0.5 個(gè)單位內， 并且和目標分子的等電點(diǎn)（pI）相差至少一個(gè) pH 單位。

                                                         Buffers for anion exchange chromatography

2.5 洗脫

     對于 DEAE 葡聚糖凝膠和 QAE 葡聚糖凝膠填料，一般使用鹽濃度遞增或 pH 值遞減（線(xiàn)性或者階梯梯 度）的方式來(lái)進(jìn)行洗脫。 

2.6 再生 

     根據樣品的性質(zhì)，通常通過(guò)用高離子強度洗脫緩沖液，如 2M NaCl 對柱子進(jìn)行洗滌，或降低緩沖液pH，然后在平衡緩沖液中重新平衡來(lái)進(jìn)行再生。在一些應用中，諸如變性蛋白質(zhì)或脂質(zhì)的物質(zhì)在再生過(guò) 程中洗脫不下來(lái)，則需要通過(guò)在位清洗程序 CIP 來(lái)清除。

2.7 在位清洗（CIP） 

     通過(guò)用 5 倍柱床體積的 2M NaCl 溶液來(lái)除去結合的蛋白質(zhì)。 

     通過(guò)用 2 倍柱床體積的 0.1M NaOH 溶液清洗填料，隨后立即用大量純水徹底清洗直至中性，從而除去沉淀的蛋白質(zhì)、疏水結合的蛋白質(zhì)和脂蛋白。 

3 保存 未使用的填料，請室溫密閉保存.使用完的填料，用純水徹底沖洗，用然后保存在 20%乙醇中，4℃保存，不能冷凍。 

4 注意事項 

     （1）上樣之前，樣品必須經(jīng)過(guò)膜過(guò)濾及去除色素，否則雜質(zhì)及色素會(huì )被吸附到填料上，影響填料的 正常使用。所有的緩沖液均需要用 0.45um 的過(guò)濾器過(guò)濾。 

     （2）在使用過(guò)程中，避免使用高濃度的強酸強堿，酸和堿的濃度應低于 0.1 摩爾。堿會(huì )使流速變慢。 

     （3）不同的樣品，吸附和洗脫方法不相同，可以根據相關(guān)的文獻進(jìn)行。 

     （4）離子交換介質(zhì)在選擇層析柱時(shí)，避免使用細長(cháng)柱，會(huì )增加實(shí)驗操作壓力。

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