應用范圍：膜電位染色

產(chǎn)品參數 

外觀(guān)：可溶于 DMSO 或 DMF 的橘紅色固體 

λEx/λEm (MeOH) = 482/497 nm 

CAS 號：905-96-4 

分子式：C21H21IN2O2 

分子量：460.31 

分子結構圖：

貯存條件 -20℃ 避光保存，保質(zhì)期一年。

產(chǎn)品介紹 

DiOC2(3) (3,3′-Diethyloxacarbocyanine, 碘化物)是一種廣泛應用的膜電位探針。如用于線(xiàn)粒體膜電位的研究，DiOC2(3) 能夠穿透真核細胞的細胞質(zhì)，在濃度低于 100 nM 時(shí)，染料在具有活躍膜電位的線(xiàn)粒體中積累，形成紅色熒光聚集體，當使用破壞線(xiàn)粒體膜電位的（如 CCCP ）處理細胞時(shí)，DiOC2(3) 染色強度降低。

DiOC2(3) 染色的細胞可以通過(guò)流式細胞儀的藍色激發(fā)， 綠色和紅色發(fā)射可視化。該試劑可與其他試劑搭配使用，例 如紅色激發(fā)的 Annexin V–APC，用于活力和凋亡的研究。

使用方法（線(xiàn)粒體膜電位檢測） 

DiOC2(3) 標記細胞

由于細胞類(lèi)型、培養條件的差異以及應用方向的不同，建議起始濃度 50 nM 摸索最佳染色條件。 

將 DiOC2(3) 溶于無(wú)水 DMSO 配制成 100 mM 的儲 液：向管中加入 435 μL 的無(wú)水 DMSO，充分溶解。每次實(shí)驗前，需將儲液充分渦旋混勻。

開(kāi)始實(shí)驗前，將 DiOC2(3) 和 CCCP 恢復至室溫。

1.1 用預熱的培養基、磷酸鹽緩沖液或其他緩沖液重懸細胞，使細胞最終密度為 1×10^6 個(gè)/mL。 

1.2 設置對照，向管中加入 1 μL CCCP 溶液至終濃度為 50 μM，37℃孵育 5 min。 

注：CCCP 可以和 DiOC2(3) 同時(shí)添加。為了獲得不同細胞類(lèi)型的最佳效果，可能需要滴定 CCCP。

1.3 配置合適濃度的 DiOC2(3)工作液，加入工作液至終濃度為 50 nM，37℃ 孵育 15-30 min。如果進(jìn)行其他標記，如用 Annexin V 結合物標記，請執行步驟 2.1；如果不需要其他染色，請繼續執行以下步驟。 

1.4 （可選）清洗細胞一次，向每個(gè)細胞管中加入適量預熱的 PBS 緩沖液。 

1.5 1000 rpm 離心 5 min 1.6 向每個(gè)管中加入 500 μL PBS 緩沖液，輕彈管壁使其重懸。

1.7 使用 YF488 染料的發(fā)射濾光片在 488 nm 激發(fā)下進(jìn)行流式分析。用 CCCP 處理的樣品調節補償。

Annexin V 結合物額外標記 

可以用額外的標記方法檢測 DiOC2(3) 染色后細胞的凋亡及生存狀態(tài)。如用 Annexin V–APC 標記：

2.1 向步驟 1.3 的細胞中加入適量預熱的 PBS 緩沖液洗 滌細胞一次。 

2.2 1000 rpm 離心 5 min，然后重懸于 100 μL 1×Annexin 結 合緩沖液中。 

2.3 加入 5 μL Annexin V 結合物（如 Annexin V–APC）。 

2.4 37℃ 孵育 15 min。

2.5 加入 400 μL Annexin 結合緩沖液。 

2.6 用適合于 YF488/PI 和 YF633 染料的發(fā)射濾光片在 488 nm 和 633 nm 激發(fā)下進(jìn)行流式分析。

注意事項 

1. 熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。 

2. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。