產(chǎn)品說(shuō)明：

     伊文斯藍(Evans Blue)又稱(chēng)偶氮藍。伊文斯藍與臺盼藍都是細胞活性染料，常用于檢測細胞膜的 完整性和細胞是否存活?；罴毎蛴型馀殴δ芏鵁o(wú)法被伊文斯藍染成藍色，而死細胞會(huì )被染成淡藍 色。因此可以通過(guò)此方法在顯微鏡下區分死細胞與活細胞，但無(wú)法區分死亡與壞死。

操作說(shuō)明：（僅供參考）

(一)血腦屏障通透性

1、取處理后的實(shí)驗動(dòng)物(以小鼠為例)，靜脈注射 Evans Blue Stain (0.5%)，小鼠眼睛、皮膚出現藍色。0.5～1h 后處死小鼠，取目的腦組織。 

2、腦組織置于 1.5ml 離心管中，加入 1ml PBS， 迅速用組織勻漿器將腦組織制成勻漿, 離心。 

3、取上清，加入等量三氯乙酸，4℃孵育。該步驟亦可采用如下操作: 取上清，按上清:丙酮=3:7 比例加入丙酮，室溫孵育 24h。 

4、離心 15min。

5、取上述溶液，用分光光度計測 620 nm 處吸光值(OD 值)。同時(shí)測定已知不同梯度的標準依文思藍的 OD 值，繪制標準曲線(xiàn)。根據標準曲線(xiàn)計算出待測樣品的伊文斯蘭含量。

(二)活細胞染色 

1、取 100μl 重懸細胞到常規離心管內，入 100μl Evans Blue Stain 輕輕混勻染色(染色時(shí)間可適當延長(cháng)，但不宜超過(guò)10min)。

2、吸取少量經(jīng)過(guò)染色后的細胞，用血細胞計數板計數。通常如果要比較精確地進(jìn)行定量，每個(gè)細胞樣品至少數 500 個(gè)細胞，數出藍色細胞和細胞總數。細胞存活率計算公式如下：細胞存活率＝(細胞總數－藍色細胞數)/細胞總數×100%

注意事項： 

1、Evans Blue Stain 對人體有輕微毒性，請小心防護。 

2、細胞染色時(shí)，注意凋亡小體偶爾也有拒染現象。 

3、血腦屏障通透性實(shí)驗中，Evans Blue Stain 注射量應根據不同動(dòng)物以及動(dòng)物的重量調整。 

4、最好采用低溫冷凍離心機進(jìn)行離心。 

5、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。